期刊简介
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首页>中国医疗前沿杂志
- 杂志名称：中国医疗前沿杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医院协会
- 国际刊号：1673-5552
- 国内刊号：11-5483/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：期刊收录：维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 知网收录(中)
慢病毒-SOX9基因载体的构建及其在小鼠骨髓间充质干细胞中过表达的研究
白洁玉；梁大川；杨自权
关键词：骨髓间充质干细胞, Sox9, 慢病毒, 软骨分化
摘要：目的 构建慢病毒-SOX9 基因载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞以得到用于基因治疗软骨损伤的种子细胞.方法 自Gene bank中获得小鼠SOX9 的cDNA序列(NM_011448.4),设计两端引物,并在其两端分别引入Xhol和BamHI 酶切位点序列,用RT-PCR法扩增出SOX9cDNA,连入慢病毒表达载体,构建慢病毒-SOX9-EGFP(Lenti-SOX9-EGFP) 重组体.通过Real time 定量PCR法测定滴度后使用Lenti-SOX9-EGFP转染小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs).采用免疫荧光和Westernblotting鉴定SOX9 在mBMSCs中的表达.结果 PCR(445bp)、DNA测序、Western blotting(83KDr)检测证明Lenti-SOX9-EGFP载体构建成功.经Real time定量PCR法测定的病毒滴度为2×108TU/ml.Lenti-SOX9-EGFP 转染mBMSCs 72h后经免疫荧光检测约80% 的mBMSCs可表达SOX9.Western blotting也证明了SOX9 在经SOX9 基因转染的mBMSCs内稳定表达.结论 获得了稳定表达SOX9 的mBMSCs,为基因治疗关节软骨损伤奠定了基础.
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